新宝GG药理学服务为您提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验，，详情可联系获得
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裸鼠服务流程

    1、操作方案设计
2、要领开发
3、细胞制备
4、裸鼠成瘤

裸鼠皮下成瘤动物实验要领 

分组:SW620细胞组、SW620转染无关siRNA组、SW620转染目的基因（每组6只）
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细胞准备及注射裸鼠要领： 到动物室准备实验
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取出未作处理的小鼠和处理后小鼠用鼠笼，，顺序摆放在超净台中
。。。。选体形较大的小鼠称重，，以3μl/g剂量，，腹腔注射10％水合氯醛麻醉小鼠
。。。。约5分钟，，小鼠最先进入清静状态，，将其仰卧牢靠
。。。。切忌麻醉剂过量使用
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(1)铺白布于鼠板上，，仰卧位牢靠小鼠四爪，，碘伏棉球消毒腹侧面上至颈部、下至腹股沟、后至腋后线
。。。。消毒两次
。。。。铺手术巾于小鼠上，，在其左侧剪口（4*4cm），，袒露其左侧腹部, 用碘伏消毒一次
。。。。在左侧肋弓下缘1cm处向下剪开2cm皮肤，，袒露腹壁肌肉，，镊子牵拉腹壁肌肉，，避开腹腔内脾脏，，剪开腹壁肌肉，，袒露内脏
。。。。用棉签蘸PBS，，拨出脾脏下极，，切忌牵拉，，以免损伤脾脏和胰腺
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(2)找到脾脏同时，，用25微升Matrigel混淆于细胞管中，，打悬细胞沉淀，，使细胞疏散匀称成单细胞悬液
。。。。用BD针吸净EP管中的单细胞悬液，，稍退针芯，，打出气泡，，在脾脏下极内侧（凹面）进针向脾门偏向约2mm最先注射细胞，，注射完毕停留约30秒钟，，缓慢退出针，，以防细胞渗透
。。。。同时用蘸PBS的棉球榨取周围出血点止血
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(3)用注射器吸收庆大霉素注射液（专心理盐水250：1稀释）约400微升，，注入腹腔，，棉球蘸干皮缘渗透的抗生素
。。。。浚浚？Ｗ钕确旌细贡诩∪猓旌4针）
。。。。再次用注射器吸收庆大霉素注射液约400微升冲洗缝合口，，棉球蘸干
。。。。缝合皮肤（中止缝合4针）
。。。。碘伏棉球消毒缝合口
。。。。吊销牢靠，，使小鼠处于自然体位，，放于鼠笼中
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(4)所有细胞注射完毕，，剪耳标记，，纪录剪耳标记及分组情形
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Day5-7：注重小鼠的状态，，实时发明小鼠是否有因手术刺激、胰腺损伤、熏染等殒命的情形
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Day42：颈椎离断，，正法小鼠，，剖解遗体，，视察脾脏肿瘤生长状态，，肝脏、肺脏及其他器官是否有转移瘤形成
。。。。所有可疑组织均做好标记，，照相，，若有外貌结节，，计数后，，冻于液氮中
。。。。视效果情形用10%甲醛溶液牢靠住宿后做病理
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裸鼠皮下成瘤实验技巧

1、细胞状态是成瘤实验的要害，，以是细胞生长状态一定要好，，取处于对数生恒久的细胞，，细胞达80-90%左右密度为宜;网络细胞前一天晚上替换新鲜作育基
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2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，，目的为去除细胞中的血清
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3、用PBS或者无血清作育基奏乐细胞沉淀至合适的浓度，，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，，接种体积为0.1ml，，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml
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4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，，一般只管在半小时内完成，，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢
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5、选择的裸鼠一般在5-8周龄，，体重18-20g左右，，莳植部位选择血供富厚区域，，如腋窝中后部、腹股沟中上部
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6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，，防止细胞成团而降低细胞成活率
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7、接种时，，针头在皮下进针深一点，，约1cm深，，镌汰注射后细胞悬液从针眼溢出
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8、怎样抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，，小拇指夹住裸鼠尾巴
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9、接种后一周左右可以见到皮下最先泛起肿块
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10、凭证肿瘤细胞的特征和接种细胞的量，，一般皮下成瘤的周期为1-2个月
。。。。肿瘤不宜生长过大，，一般不要凌驾1000mm3 ，，肿瘤负荷过大常；；；嵋晕シ炊锫桌矶辉又旧绲竽(由于这个问题凄凉地被plos one拒过稿）
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11、肿瘤巨细丈量一般为1周两次，，游标卡尺丈量肿瘤最长和最短部位
。。。。V=1/2*a*b2 (a为长轴，，b为短轴)
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12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提卵白和RNA，，一部分福尔马林牢靠用做免疫组化、免疫荧光等
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